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10-19
今天小編給大家講講高效液相色譜柱峰形拖尾的9個(ge) 原因:1.色譜柱物理損壞色譜柱有物理損壞是造成峰形拖尾的根源,解決(jue) 方法就是更換新柱。2.色譜柱內(nei) 填料汙染流動相和樣品中的雜質是色譜柱主要汙染源。流動相所用的各種溶劑至少是分析純,盡量使用色譜純試劑。流動相所用的水要是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過濾(器)過濾,除去可能存在的微粒。流動相建議現用現配,對於(yu) 含鹽的溶液尤其注意長置會(hui) 產(chan) 生細菌或出現沉澱。此外還得保證儲(chu) 存流動相的容器清潔。複雜樣品可選用0.45um...
10-12
高效液相色譜柱是由柱管、壓帽、卡套(密封環)、篩板(濾片)、接頭、螺絲(si) 等組成。柱管的材質有很多,比如聚合物、玻璃、不鏽鋼等。但是建議柱管用不鏽鋼材質,因為(wei) 不鏽鋼這種金屬耐高壓、耐腐蝕且硬度高,相比於(yu) 玻璃等材質不易摔壞。不過當壓力不高於(yu) 70Kg/cm2時,也可采用厚壁玻璃或石英管。對於(yu) 色譜柱柱管內(nei) 壁要求有很高的光潔度,不鏽鋼柱內(nei) 壁會(hui) 經過多次拋光,這是為(wei) 提高柱效,減小管壁效應。0.1μm高光潔度色譜柱柱管能夠快速分析的同時保持超高的柱效;使用壽命長,不僅(jin) 能夠減少頻繁更換色譜柱帶來...
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高效液相色譜柱是色譜分離的核心。一支合適,穩定,高效的色譜柱對建立普適性強,重現性好的方法是不可少的。因色譜柱是消耗品,隨著使用時間或進樣次數的增加,會(hui) 出現色譜峰高降低,峰寬加大或出現肩峰的現象,一般來說是柱效的下降。此時需要對色譜柱進行再生:(1)反相柱的再生,采用以甲醇:水=90:10(V/V),純甲醇,異丙醇,二氯甲烷等溶劑作流動相,順次衝(chong) 洗,每種流動相流經色譜柱的量為(wei) 20~30倍色譜柱體(ti) 積然後再以相反順序衝(chong) 洗色譜柱。(2)正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲...
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高效液相色譜柱性能影響因素有很多,例如,矽膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表麵積、孔徑,化學性質包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端,在選擇高效液相色譜柱之前,先多了解自己的樣品和雜質,他們(men) 的類型結構、極性、酸堿性、分子量大小等等。1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測,即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。2.如果樣品極性太強,或酸性太強;可以選擇CN,NH2,或矽膠柱,HILIC(親(qin) 水色譜),也有使用C18+強陰離子對試劑...
8-18
高效液相色譜柱的鍵合基質分為(wei) 矽膠基質、聚合物基質等,其中矽膠基質應用較為(wei) 廣泛,其特點主要包括以下3方麵:(1)低pH值,矽膠鍵合鍵容易水解(pH8)。(2)在接近中性的條件時,矽醇基裸露,顯酸性,不適宜分離堿性化合物。(3)某些矽膠被一定金屬汙染,這些金屬會(hui) 引起峰的不對稱或拖尾,甚至化合物的死吸附。高效液相色譜柱的矽膠基質可分為(wei) 全多孔矽膠微粒、雜化矽膠顆粒和實心核矽膠顆粒。1、全多孔矽膠基質:全多孔矽膠,以其全多孔的結構特點具有很高的比表麵積,故具有很高的柱效。其機械強度大的...
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反相色譜是迄今在高效液相色譜中應用*泛的技術,主要是因為(wei) 它適用於(yu) 分析絕大多數的非極性物質和很多的可離子化的及離子化合物。如果汙染是因為(wei) 重複進樣時強保留物質的累積引起的,利用簡單的清洗步驟來除去這些汙染物往往就能恢複其色譜性能。經過等度運行後的高效液相色譜柱,有時用90~100%含量的溶劑B(雙溶劑反相係統中洗脫能力較強的溶劑,如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)衝(chong) 洗20個(ge) 柱體(ti) 積可以清除汙染物(色譜柱的柱體(ti) 積和空柱管體(ti) 積概念不同,一根4.6x250mm柱子的柱體(ti) 積隻有2.5ml,2.1x...
7-19
液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分,其化學性質參數包括以下幾個(ge) 方麵:1、矽膠基質矽膠基質是通用的基質,強度大,化學修飾容易,但使用的pH值範圍有限(一般為(wei) 2—8,特殊修飾的可以達到1—12)。2、聚合物基質聚合物基質多為(wei) 聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂,化學穩定,應用pH範圍寬,具有更強的疏水性,對蛋白質等樣品分離效果較好;但強度較小,有機溶劑可能導致聚合物溶脹而受損,批次重複性較差,商品化色譜柱不多,一般價(jia) 格較貴。3、載碳量載碳量是基質表麵鍵合相的比例,載碳量高,則...
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